微生物菌種凍干機：液氮超低溫保藏技術

微生物菌種真空凍干機是在抽真空的狀態下讓物質在低溫下干燥的設備，主要用于微生物制劑和生物活性物質的干燥。菌種保藏室用來對微生物進行真空凍干保藏。微生物冷凍干燥法是長期保藏菌種的較好方法之一。因其便于批量生產、長期保藏成活力高，保藏和運輸設備簡單而成為一種普遍使用的保藏方法，已廣泛應用于保存大部分細菌、真菌和一些病毒。液氮罐

1.安瓿管或凍存管的準備
   用圓底硼硅玻璃制品的安瓿管，或螺旋口的塑料凍存管。注意玻璃管不能有裂紋。將凍存管或安瓿管清洗干凈， 121℃下高壓滅菌15-20分鐘，備用。

2.保護劑的準備
   保護劑種類要根據微生物類別選擇。配制保護劑時，應注意其濃度，一般采用10-20%甘油。

3.微生物保藏物的準備
   微生物不同的生理狀態對存活率有影響，一般使用靜止期或成熟期培養物。分裝時注意應在無菌條件下操作。

4.菌種的準備可采用下列幾種方法：
   刮取培養物斜面上的孢子或菌體，與保護劑混勻后加入凍存管內；
接種液體培養基，振蕩培養后取菌懸液與保護劑混合分裝于凍存管內；
將培養物在平皿培養，形成菌落后，用無菌打孔器從平板上切取一些大小均勻的小塊（直徑約5-10毫米），真菌取菌落邊緣的菌塊，與保護劑混勻后加入凍存管內；
在小安瓿管中裝1.2-2毫升的瓊脂培養基，接種菌種，培養2-10天后，加入保護劑，待保藏。

5.預凍
   預凍時一般冷凍速度控制在以每分鐘下降1℃為好、使樣品凍結到-35℃。
目前常用的有三種控溫方法：
—— 程序控溫降溫法，應用電子計算機程序控制降溫裝置，可以穩定連續降溫，能很好地控制降溫速率。
—— 分段降溫法：將菌體在不同溫級的冰箱或液氮罐口分段降溫冷卻，或懸掛于冰的氣霧中逐漸降溫。一般采用二步控溫，將安瓿管或塑料小管，先放-20℃至-40℃冰箱中1-2小時，然后取出放入液氮罐中快速冷凍。這樣冷凍速率大約每分鐘下降1-1.5℃。
—— 對耐低溫的微生物、可以直接放入氣相或液相氮中。

6.保藏
   將安瓿管或塑料凍存管置于液氮罐中保藏。一般氣相中溫度為-150℃，液相中溫度為-196℃。
保藏周期
一般10年以上。

7.復蘇方法
   從液氮罐中取出安瓿管或塑料凍存管，應立即放置在38℃-40℃水浴中快速復蘇并適當搖動。直到內部結冰全部溶解為止，一般約需50秒-100秒。開啟安瓿管或塑料凍存管，將內容物移至適宜的培養基上進行培養。

8.適用范圍
   各類微生物。
液氮保藏應注意事項
—— 防止凍傷，操作注意安全，帶面罩及皮手套
—— 塑料凍存管一定要擰緊螺帽
—— 運送液氮時一定要用專用特制的容器，絕不可用密閉容器存放或運輸液氮，切勿使用保溫瓶存放液氮
—— 注意存放液氮容器的室內通風，防止過量氮氣使人窒息
—— 防止安瓿管或塑料凍存管破裂爆炸，如液氮滲入管內，當從液氮容器取出時，液態氮體積膨脹約680倍，爆炸力很大，要特別小心 液氮罐
—— 注意觀察液氮容器中液氮的殘存量，定期補充液氮。